ДНҚ-ны дәл сандық анықтау молекулалық биологиядағы, генетикалық зерттеулердегі, клиникалық диагностикадағы және биотехнологиялық жұмыс процестеріндегі іргелі қадам болып табылады. Дәл өлшеу үшін қажетті үлгінің ең аз көлемін анықтау негізінен қолданылатын технологияға және құралдың сезімталдығына байланысты. Осы факторларды түсіну зертханаларға сенімді нәтижелерді сақтай отырып, қалдықтарды азайтуға көмектеседі.
Дәстүрлі спектрофотометрия және көлемге қойылатын талаптар
Кюветтерді пайдаланатын әдеттегі спектрофотометрлер әдетте 500 ?L және 1 мл үлгіні қажет етеді. Бұл үлкен көлем тұрақты оптикалық жолды және тұрақты сіңіру көрсеткіштерін қамтамасыз етеді. Дегенмен, сирек немесе қымбат ДНҚ үлгілерімен жұмыс істегенде мұндай талаптар практикалық болмауы мүмкін.
Микрокөлемді спектрофотометрлер
Қазіргі микрокөлемді спектрофотометрлер қажетті үлгі өлшемін айтарлықтай азайтады. Көптеген жүйелер 1 – 2 ?л үлгіні пайдаланып ДНҚ концентрациясын дәл өлшей алады. Бұл құралдар ең аз сұйықтық көлемдерінде де дәлдікті сақтау үшін қысқа, дәл басқарылатын оптикалық жол ұзындығы мен сезімтал детекторларға сүйенеді.
Бұл прогресс құнды үлгілерді сақтап қана қоймайды, сонымен қатар реагент тұтыну мен дайындау уақытын қысқартады, бұл оны өнімділігі жоғары зертханалар үшін тамаша етеді.
Төмен концентрациялы үлгілерге арналған флюорометриялық әдістер
Өте төмен ДНҚ концентрациясы үшін флюорометриялық сандық анықтау әдістері флуоресцентті бояумен араласқан 1 – 10 ?L үлгіні қажет етуі мүмкін. Бұл әдістер жиі сіңіру негізіндегі өлшемдерге қарағанда сезімталырақ және өте сұйылтылған ерітінділерде ДНҚ-ны анықтай алады. Олар әсіресе келесі ұрпақ секвенциясы немесе ПТР қолданбалары үшін үлгілерді дайындау кезінде пайдалы.
Дәлдікке әсер ететін факторлар
Шағын көлемдер мүмкін болғанымен, дәлдік бірнеше факторларға байланысты:
Жетілдірілген құралдардың өзінде үлгіні сәйкессіз өңдеу нәтижелерді бұзуы мүмкін. Зертханалар қайталануды қамтамасыз ету үшін стандартталған хаттамаларды орындауы керек.
Сезімталдық пен практикалықлықты теңестіру
Дәл ДНҚ сандық анықтау үшін қажетті ең аз үлгі көлемі заманауи микрокөлемдік технологияны пайдаланған кезде 1 ?L дейін төмен болуы мүмкін. Дегенмен, сәйкес әдісті таңдау концентрация диапазонына, төменгі ағынға және қол жетімді жабдыққа байланысты.
Қорытынды
Микрокөлемді және флюорометриялық технологиялардағы жетістіктердің арқасында дәл ДНҚ сандық анықтау бұдан былай үлкен үлгі көлемін қажет етпейді. Көптеген жағдайларда сенімді өлшеу үшін 1 – 2 ?L жеткілікті. Дұрыс әдісті таңдап, тиісті зертханалық тәжірибені сақтай отырып, зерттеушілер құнды ДНҚ үлгілерін сақтай отырып, нақты нәтижелерге қол жеткізе алады.
